培養基是食用菌生長需要的營養基質。根據試驗或生產的需要常把菌種分為母種、原種、生產種。培養基必需含有菌體生長的所有營養物質，每種物質有適當的濃度比例，適宜的酸堿度。制備培養基的物質可因地制宜，來源廣，安全，無毒，成本低而適當選用。培養基要經嚴格滅菌，保證無菌狀態才可使用，以達到食用菌純培養的目的。下面例子介紹培養基的制備方法。
一、母種：馬鈴茨蔗糖瓊脂培養基
馬鈴茨200克 蔗糖15克 酵母膏0.2克
維生素B1 0.1克 瓊脂20克 水加至1000毫升 酸堿度7.2―7.4
把馬鈴茨去皮后稱取200克，洗干凈切片加適量水煮沸15分鐘，雙層紗布過濾取清液，得馬鈴茨汁。茨汁加入20克瓊脂加水至1000毫升煮到瓊脂熔化，再加入蔗糖、酵母膏、B1，邊加邊攪拌，并注意補水至1000毫升，用5%鹽酸或10%氫氧化鈉調酸堿度至7.2―7.4。趁熱分裝三角瓶要定量或試管，每管約裝管長的1/5―1/4為宜。包扎好，寫標簽。在攝氏115度下滅菌20分鐘，試管滅菌后擺斜面。
二、原種：麥粒種
麥粒87克，碳酸鈣2克，干糞粉6克，谷殼5克。
做法：去什的麥粒稱取87克，洗干凈后浸水8小時，冬天用暖水浸，加水到麥粒表面，旺火煮20分鐘。要求麥粒不裂皮，無白心。稍涼后濾去水分，拌入糞粉、碳酸鈣、谷殼，拌勻，趁熱裝入750毫升菌種瓶，約裝瓶身的3/4量，用干凈布抹干凈瓶口，包扎好，寫標簽。攝氏121度滅菌30分鐘。
三、生產種：糞草種
糞干粉49克，麥桿（稻桿）碎49克，石膏2克，水適量。
做法：糞干磨成粉狀，草料切成5厘米長，加入石膏粉，邊拌邊灑水，加水至手捏指間有水分滲出但不成水滴為宜。把拌勻的料埋堆，加塑料膜覆蓋，堆漚3天，料堆發熱，把料攤開、翻勻，再埋堆，如此反復進行，至草料金黃色變軟為適合，裝入750毫升菌種瓶，裝至瓶身的3/4，用干凈布抹干凈瓶口，包扎好，寫標簽，攝氏121度滅菌30分鐘。
以上介紹的幾種培養基的配制方法，可隨時隨地因物品的變化而適當改變，如馬鈴茨可用胡蘿卜、豆芽汁代用，草料可用木屑，破籽棉代用。糞干可用麩皮、米糠、玉米粉、黃粉等代用，同樣有良好的效果。
