【作者】郝帥 郭建強 李運敏 岳麗麗 矯慶華
【機構】中國科學院微生物研究所三元基因有限公司VA Medical Centre 111C5 Department of Medicine University of Californiaat San Francico 4150 Clement StreetSan FranciscoCA 94121USA北京100080中國科學院研究生院北京100049北京100083
【摘要】利用畢赤酵母的質粒載體pPIC9K將極端耐熱古菌Pyrococcusfuriosus的超耐熱酸性α-淀粉酶(Amy)基因轉化到多型漢遜酵母HP-6中,獲得重組漢遜酵母。經過甲醇進行誘導,表達產物的酶活性檢測和SDS-PAGE電泳,證明α-淀粉酶(Amy)在多型漢遜酵母中利用AOX1啟動子和α-因子信號肽有效表達并分泌到胞外。該酶的最適反應溫度為90～100℃,最適作用pH為4.0～5.0,較之重組畢赤酵母的最適作用pH還低0.5。此外與畢赤酵母的重組蛋白相比,重組漢遜酵母α-淀粉酶不僅菌株篩選簡便、周期短,而且具有更容易篩選到高拷貝轉化子以及適用于大規模工業發酵等優點。
【基金】國家科技攻關計劃(2001BA708B03-03)；
【關鍵詞】Pyrococcusfuriosus; AOX1啟動子; MOX啟動子; α-因子信號肽;