【作者】黃河 毛偉敏 鄭儒永
【機構】中國科學院微生物研究所真菌地衣系統學開放研究實驗室
【摘要】應用一對寡核苷酸引物ITS1與ITS4對核DNAG＋C百分數小于30％的小克銀漢霉（Cunninghamella）屬的核糖體DNA（rDNA）內轉錄間區（YTS）進行了擴增。測試的屬于10個種和變種的22株菌都得到了擴增產物。在同屬不同種之間擴增的ITS片段長度有巨大差別。據此可分為三組。這三組所含分類群數及其DNA長度分別為；第一組4種1變種，小于764堿基對（bp）；第二組2種，765～824bp；第三組2種1變種，大于825bp。所研究的許多種中，特別是第三組，單憑其PCR產物的長度就能區分開來。但在第一、二組就需借助限制性內切酶的分析才能予以區分。我們選用了RsaI，TaqI；Tru9I，和HinfI4種限制性內切酶，對所有擴增產物進行了限制性片段長度多型性（RFLPs）的分析。在雅致小克銀漢霉（Celegans）、巴西玉蕊小克銀漢霉（Cbertholletiae）、和布拉氏霉（Cblakesleeana）各種的限制性酶切圖譜，種內非常一致而種與種之間有差別。反之，在某些種其限制性酶切圖譜不僅種間互不相同，在種內不同株之間也出現1～3種酶切圖型的差異。在這種情況下，只能綜合各種資料才能將它們區分開來。本研究肯定了PCR－RFLP在區分小克銀漢霉種和變種上的意義，并發現種內個體的差異。這在我們后來所進行的序列分析研究中得到了進一步的證實。
【關鍵詞】小克銀漢霉屬; 毛霉目; 分類; PCR; 限制性片段長度多型性; 內轉錄間區;