【作者】王紅寧 馬孟根 吳琦 劉世貴 羅燕
【機構】四川農業大學動物科技學院；四川大學生命科學學院；
【摘要】從黑曲霉N25(A.niger China strain)中提取出染色體DNA,根據已經測定出的植酸酶phyA基因全序列設計了一對引物,采用高保真度的聚合酶Advangage-HF擴增到了去除信號肽和內含子后約1.4kb片段,對該片段進行了克隆及序列測定。將該序列與植酸酶phyA基因全序列進行了比較。以此片段構建成功了pPIC9K-phyA載體(命名為pPNP-1),并轉化畢赤巴斯德酵母。經G418抗性篩選、酶活性測定、Southern印跡和Western印跡,獲得了高效表達的轉化子PP-NP-1(23869.4u/ml)、PP-NP-2(20533.0u/ml)、PP-NP-3(35646.7u/ml),其酶活性分別是出發菌株的酶活(513.4u/ml)的46.46倍、39.99倍和69.46倍,且轉化子具有很好的遺傳穩定性。
【基金】獲國家科技部“九五”國家重點科技攻關計劃資助；
【關鍵詞】黑曲霉; 植酸酶; phyA基因; 畢赤酵母; 高效表達;