【作者】李紅霞 周明國 陸悅健
【機構】南京農業大學農業部病蟲監測與治理重點開放實驗室南京農業大學農業部病蟲監測與治理重點開放實驗室 南京210095
【摘要】通過保守的寡核苷酸引物B1/B3擴增出油菜菌核病菌MBCHR和MBCS菌株的部分β-微管蛋白基因,結果發現編碼的198位氨基酸由Glu(GAG)突變為Ala(GCG),表現高水平抗藥性。根據MBCHR菌株的突變設計2個快速檢測方法:第一種方法是根據MBCHR菌株197和198位密碼子(GACGAG→GACGCG)形成ThaI酶切位點(3’CGCG 5’),將B1/B3的擴增產物874bp片段酶切成193bp和681bp片段,而MBCS菌株的PCR產物不被酶切;第二種方法用198位突變密碼子作為3’末端堿基設計2個等位基因特異性寡核苷酸引物(ASO)用于“nested”PCR或直接從基因組DNA擴增。通過PCR擴增和ThaI酶切能直接檢測油菜菌核病菌的MBCHR和MBCS菌株,所得結果與傳統菌落直徑法相吻合。
【基金】國家“863”計劃(2001AA249041)； 國家自然科學基金(30070510)；
【關鍵詞】植物病原真菌; 苯并咪唑類殺菌劑;