【作者】孫劍秋 周東坡 馬玉超 李晶 解玉紅 張鵬 平文祥
【機構】齊齊哈爾大學生命科學與工程學院；黑龍江大學生命科學學院 齊齊哈爾161006
【摘要】以紫杉醇產生菌樹狀多節孢HQD33的誘發突變株UL50-6和UL40-19 為出發菌株,將收集到的出發菌株UL50-6和UL40-19的菌絲體分別用pH5.5~6.0的0.7mol/L NaCl配制的3%溶壁酶、2%蝸牛酶、1%溶菌酶組成的復合酶系,30℃恒溫酶解3~5h,制備原生質體。兩菌株的原生質體經純化后分別用熱和紫外線滅活,其中UL50-6的原生質體在54℃熱滅活5分鐘,UL40-19的原生質體在30W紫外燈下,30cm,照射85秒進行紫外滅活,雙親株的原生質體存活再生率為零。同時對融合條件進行了初步探索,以含有Ca2+和Gly的35%~40%的PEG作為融合劑,融合時間為20分鐘時,融合率可以達到4.44?0-2~6.92?0-2。對融合株TPF-1與雙親株的形態學、可溶性蛋白、過氧化物同工酶進行分析,確證其為雙親株的融合子。
【基金】黑龍江省自然科學基金資助項目(93-C-11)； 黑龍江省“九五”重大攻關項目(G98C20-16-1)；
【關鍵詞】樹狀多節孢; 原生質體; 融合; 滅活;