【作者】秦文彥 程潔 應盛華 馮明光
【機構】浙江大學微生物研究所浙江出入境檢驗檢疫局技術中心浙江大學微生物研究所 杭州310058杭州310012
【摘要】根據黃曲霉毒素生化途徑中的關鍵調控基因aflR、omt-1和ver-1的序列以及真菌共有的5.8S rDNA的ITS序列分別設計ApaF/ApaR、OmtF/OmtR、VerF/VerR及ITS1/ITS4四對引物,研究建立產黃曲霉毒素真菌及其潛在飼料或食品污染的多重PCR快速靈敏檢測體系。PCR擴增的4個DNA片段中,1032bp、797bp和600bp與基因庫中對應基因或DNA序列的同源性達99%以上,僅452bp片段與對應基因ver-1的同源性為98%。通過優化主要影響因子,建立了快速檢測產黃曲霉毒素真菌的單管多重PCR反應體系,并用于6種曲霉和1種青霉DNA樣品的檢測。結果顯示,上述4個片段均平行地清晰出現在2株黃曲霉Aspergillus flavus和1株寄生曲霉A.parasiticus的DNA樣品中,而其余菌種只檢測到ITS片段,說明檢測特異性很好。靈敏性分析表明,多重PCR檢測的保守靈敏度為1ng/μL樣品DNA,所有目標片段的條帶均很清晰;即使DNA濃度降至0.1ng/μL,除aflR之外的所有條帶也可分辨。
【基金】國家質量監督檢疫總局資助項目(No.2006IK151)；
【關鍵詞】黃曲霉毒素; 曲霉; 青霉; 快速檢測體系; 反應條件優化; 特異性; 靈敏性;