【作者】李志勇 劉磊 曹志艷 董立 董志平
【機構】河北省農林科學院谷子研究所河北農業大學生命科學學院
【摘要】漆酶是一種含銅的多酚氧化酶,與植物病原菌致病性、黑色素合成及降解木質素等方面相關。為明確漆酶在新月旋孢腔菌的催化作用及其催化活性,以2,2′-連氮-雙(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(簡稱ABTS)為底物,利用分光光度計在420nm下測定胞內漆酶活力,結果表明酶活測定最佳反應條件為緩沖液pH2.8、Cu2+濃度500μmol/L和0.6mmol/LABTS。根據漆酶Cu2+結合保守結構域設計了1條引物,對新月旋孢腔菌漆酶基因進行克隆,并通過RACE技術克隆了其全長cDNA序列。開放閱讀框長1,803bp,編碼600個氨基酸,通過生物信息學分析,發現新月旋孢腔菌漆酶基因與其他植物病原菌漆酶基因具有較高的同源性,新月旋孢腔菌漆酶基因編碼的蛋白含有4個銅離子結合位點保守域及8個潛在N-糖基化位點,并且氮端存在信號肽序列。在新月旋孢腔菌漆酶基因啟動子區發現1個金屬響應原件(MRE)、1個壓力響應原件(STRE)、2個CreA結合位點和4個氮因子結合位點。
【基金】谷子產業技術體系(No.CARS-07-12.5-A8)；
【關鍵詞】新月旋孢腔菌; 胞內漆酶活性; 漆酶基因; 基因克隆;