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          CTAB法提取食用菌DNA


          【發布日期】:2011-07-01

          參考:王關林,方宏筠主編,植物基因工程[M].第2版,北京:科學出版社,2002,742-744.

          1)        取1克菌絲放入研缽,加入液氮迅速研磨成粉末,轉入7 mL的離心管,加2.5mL 65℃預熱的抽提液(2 %(m/v)CTAB,100m mol/L Tris-HCl PH8.0,20mmol/L EDTA PH8.0,1.4mol/L NaCl),加巰基乙醇50μl,震蕩,使蛋白質變性沉淀;

          2)        65℃水浴1 h,每隔10 min振蕩1次,加入2.5 mL的氯仿/異戊醇(24/1)混勻,除去蛋白質;

          3)        8000 rpm,4℃離心10 min,取上清;

          4)        加1/5體積65 ℃預熱的CTAB/NaCl混勻,加入2.5 mL的氯仿:異戊醇(24:1)混勻;

          5)        10000 rpm, 4℃離心10 min,取上清,加入2.5 ml的CTAB沉淀液,顛倒,混勻。65℃水浴1.5h至沉淀可見;

          6)        12000 rpm,4℃離心10 min后,去除上清液,用0.5ml無菌水溶解沉淀10 min;

          7)        加入0.25 mL飽和酚和0.25 mL氯仿:異戊醇(24:1),混勻;

          8)        12000 rpm,4℃離心10 min,取上清,加入2倍體積預冷的無水乙醇,混勻,-20 ℃冰箱放置30 min;

          9)        12000 rpm,4℃離心10 min;棄上清,加70%乙醇洗滌沉淀2次,自然風干,再加100μlTE溶解,-20 ℃保存備用。

           

           
           
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