【作者】張雷剛 羅淑芬 周宏勝 胡花麗 李鵬霞
【機構】江蘇省農業科學院農產品加工研究所江蘇省農業科學院園藝產品產后處理工程實驗室
摘要：以生防真菌黑附球菌原生質體為受體、潮霉素抗性基因(hph)為篩選標記,應用PEG介導法進行了遺傳轉化體系的研究。潮霉素敏感性測試結果表明,黑附球菌對潮霉素的耐受濃度為50mg/L。PEG介導的黑附球菌原生質體最佳遺傳轉化體系為:30℃下用2%裂解酶酶解黑附球菌菌絲2h,過濾收集原生質體,經MTC清洗重懸后將質粒p YF11-hph轉化黑附球菌原生質體,在RM培養基中混勻再生;經潮霉素藥劑篩選和PCR驗證,表明外源基因hph已轉入到黑附球菌中并獲得穩定表達。本實驗成功地建立了穩定的PEG介導的黑附球菌遺傳轉化體系,為研究其代謝途徑、生防機制及構建工程菌株提供了技術保障。
基金：農作物生物災害綜合治理教育部重點實驗室/農業部華東作物有害生物綜合治理重點實驗室開放基金； 江蘇省農業科技自主創新資金[CX(17)3012]~~；
關鍵詞：PEG介導; 黑附球菌; 遺傳轉化; 原生質體; 工程菌株;