1.酸堿度調節
一般用10%鹽酸或10%氫氧化鈉調pH值。用pH值試紙進行測試。調pH值時要小心，一滴一滴地加酸或堿，不要調得過酸或過堿，以避免某些營養成分被破壞。
在食用菌菌絲生長過程中，菌絲將碳水化合物分解成有機酸類，使培養基逐漸呈酸性；另外，有機酸類被同化后，培養基逐漸呈堿性。為防止培養基酸堿度出現大的波動，常在培養基中加人少量磷酸鹽作為緩沖液。
2.分裝
培養基配好后，趁熱將其按需要分裝于三角瓶或試管內，以免瓊脂冷凝。溫度低時，要保溫分裝。分裝時應避免培養基黏附管口或瓶口。瓊脂若黏著棉塞，會影響接種，還易引起雜菌滋生。分裝用漏斗或橡膠管進行。裝入三角瓶的培養基量，一般不要超過瓶容量的1/3；裝入試管中的量，最好不要超過管長的1/5。
3.塞棉塞
分裝后，塞好棉塞。做棉塞用普通棉花，不要用脫脂棉。棉塞的作用是既通氣又過濾空氣，避免雜菌污染培養基。
塞入試管的棉塞要緊貼管壁，不留縫隙，大小、松緊均勻適度。檢查松緊的方法是：將棉塞提起，試管跟著被提起而不下滑，表明棉塞不松；將棉塞拔出，可聽到有輕微的聲音而不明顯，表明棉塞不緊。
4.捆把
棉塞塞好后，每7支同樣規格的試管包扎成1把，試管棉塞部分要包上一層牛皮紙或雙層報紙，用繩捆扎在管壁或瓶頸上。包紙的作用是避免滅菌時冷凝水淋濕棉塞，并防止接種前培養基水分散失或被雜菌污染。
5.滅菌
試管包扎好后，放人鐵絲筐中，豎直放人高壓滅菌鍋內滅菌。在壓力升至0.05MPa時排放冷空氣， 然后再在0.11MPa下滅菌20~30min。滅菌時間不能過長，否則易破壞培養基的營養成分，使酸度增加、凝固不良。滅菌后待溫度緩慢降到60℃時再擺成斜面，以防冷凝水在管內積聚過多。
6.擺斜面
擺放方法是將1cm厚的木板或鋼板平放于平臺或地上，然后將滅過菌的試管口朝上擺放于板上冷卻凝固即成斜面培養基。擺放后在試管上覆蓋棉布保溫也可減少冷凝水過多。斜面長度占試管總長的1/2，最多不超過3/5。
