母種制作
雞腿蘑菌種主要采用組織分離法得到純菌種。雞腿蘑菌絲在PDA培養基(馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂20克，加水至1000毫升)上生長良好。在以下加富培養基或麥粒煎汁培養基上菌絲生長得更好。
1、馬鈴薯200克、葡萄糖20克、硫酸鎂1.5克、磷酸二氫鉀1.5克、磷酸氫二鉀1.5克、維生素B110毫克、瓊脂20克，加水至1000毫升。
2、小麥200克，浸泡10小時，煮30分鐘，濾汁，加葡萄糖20克、蛋白胨3克、硫酸鎂0.5克、磷酸二氫鉀1.0克、維生素B10.2克、瓊脂20克，加水至1000毫升。
3、小麥250克，浸泡10小時，煮30分鐘，濾汁，加馬鈴薯150克、葡萄糖20克、蛋白胨2克、硫酸鎂1.5克、磷酸二氫鉀1.5克、維生素B110毫克、瓊脂20克，加水至1000毫升。菌絲最初白色，然后變成灰白色，培養基的顏色也隨之加深。在恒溫箱中，25℃條件下菌絲在7—10天可長滿斜面，最快的5—6天。
原種制作
采用稻草、棉籽殼、雜木屑三種原料為主制作培養基和用麥粒制作培養基。試驗證明，雞腿蘑的菌絲在這幾種培養基上都可以正常生長，但在以麥粒和棉籽殼為主的培養基上生長最好。各種原種培養基的配方如下：
1、稻草培養基稻草(切段或粉碎)60%、麩皮25%、玉米粉8%、復合肥5%、糖1%、石灰1%。
2、棉籽殼培養基A棉籽殼90%、麩皮4.5%、玉米粉4.5%、石灰1%。
3、棉籽殼培養基B棉籽殼87.5%、麩皮10%、尿素0.5%、石灰2%。
4、棉籽殼培養基C棉籽殼78%、麩皮10%、玉米粉5%、復合肥5%、糖1%、石膏1%、維生素B1微量。
5、木屑培養基雜木屑75%、麩皮15%、玉米粉8%、糖1%、石膏粉1%、維生素B1微量。
6、麥粒培養基麥粒加水，浸泡10—15小時，加1%石灰粉煮沸30分鐘(至無白心，而皮不破)，稍晾后裝瓶。
以上培養基的含水量均控制在60%—65%，所有培養基均保持自然pH值，按常規方法裝瓶，塞棉塞，常壓或高壓蒸汽滅菌。冷卻后，在無菌箱或無菌室中無菌操作接入母種，置于24—26℃的溫室或溫箱中培養。經30—35天雞腿蘑菌絲就可以長滿全瓶。除固體菌種外，雞腿蘑的原種也可以用液體培養基進行培養，制成液體原種。在各母種培養基配方中取消瓊脂，即可作為液體培養基配方。
雞腿蘑菌種的好壞對子實體的產量影響甚大，應加以注意。菌株不同，菌絲的形態也不完全一樣。有的菌株起初是線狀的，后來逐漸產生氣生菌絲；有的菌株起初是棉絮狀，后來逐漸變成線狀，色澤為白色或灰白色。好的菌種利用培養料的能力強，菌絲生長較快。
栽培種制作
1、栽培種培養基
?、偻鲜鲈N培養基配方。
?、陔s木屑78%、麩皮20%、碳酸鈣1%、蔗糖1%，料水比為1：1.5，pH值自然。
?、?a href="http://www.chrislangwrites.com" target="_blank">蘑菇堆肥28%、木屑60%、麩皮12%，料水比1：1.4—1.5，pH值自然。
2、制作方法栽培種的培養容器采用聚丙烯塑料薄膜袋(長34—36厘米，寬14—17厘米，厚度0.05—0.06厘米)。
?、倬唧w操作。選用上述培養基配方，按要求把原輔材料備好，加水攪拌均勻，然后裝袋。
裝袋時先抓2—3把培養料裝進袋中，用手把袋底的邊角壓入袋內，并壓緊培養料使之成圓柱形，袋底平穩能直立于地面。在袋中插入圓形木棒或直徑2—2.5厘米的試管，最好插到底，但應避免刺破袋子，而后繼續邊裝料邊用手壓實，裝至袋長的2/3(約500克干料)，壓平表而，拔出木棒或試管。這樣預埋管(棒)再裝斜，拔出后留下的洞穴堅固、在搬運過程中不易堵塞，滅菌時蒸汽容易穿透培養料，滅菌能更徹底，而且接種時原種落入洞底，加速菌絲生長、縮短栽培種培養時間。培養料裝好后，將袋口及表面弄干凈，在袋口上套上硬塑料套環(內徑3.5厘米，高3.5厘米)，讓袋口薄膜從環內通過，并向外順環壁朝下翻轉，然后將袋口整平，塞上棉塞，進鍋滅菌。為防止棉塞受潮，進鍋后每層塑料袋上方都要蓋牛皮紙。以1.5公斤/平方厘米的蒸汽壓力滅菌1.5小時，或常壓蒸汽滅菌8—10小時，滅菌后取出冷卻。
?、诮臃N與培養。栽培種也應在無菌箱或無菌室內按無菌操作要求接種，然后與原種同樣條件進行培養。
