我所經過多年研究，人工馴化栽培蛹蟲草獲得成功，并實現了規?；a。但在生產實踐中，我們遇到了一個普遍性的難題，就是蛹蟲草菌種的遺傳變異顯著，優良性狀不能完全穩定遺傳，且極易老化或退化。一般來說，從野生蛹蟲草菌株中分離的一個較好菌株，幸運的話可能會使用1～2年，保持優質高產。但通常是使用半年左右，甚至是傳種幾代后菌種就嚴重退化，表現特征是不長或只長出極少量子實體，而且質量極差，給批量栽培帶來極大的風險。為了降低這種因菌種退化而帶來的風險，我們在菌種復壯方面做了大量工作，獲得了適合于蛹蟲草菌種復壯的較好方法?，F介紹如下，供廣大同行參考。
1 材料與方法
1.1 試驗材料
?、?菌株cm-A，由本實驗室提供。
?、?培養基及培養條件：
培養基配方：1000mL培養基中土豆200g，蔗糖30g，硫酸鎂1.5g，磷酸二氫鉀3g，VB1，1mg。最后調pH為6～6.5（固體培養基加2%的瓊脂粉即可）。土豆去皮后稱200g，切小塊，煮開后繼續煮0.5h，4～5層紗布過濾，高壓滅菌30min。
培養條件：24～25℃靜止培養2d后，120r/min，培養5d。
1.2 試驗方法
1.2.1 組織分離法 選無雜菌的罐頭瓶中長度2～3cm狀態好的子實體，用無菌水沖洗，刮掉表層，取肉質1mm大小于斜面培養基上，24～25℃培養15d，菌絲布滿斜面，再經子實體栽培，反復篩選，得到菌株cm～B。
1.2.2 孢子分離法 選擇形態好、生長勢健壯并能代表該品種性狀的接近成熟子實體，懸掛式采孢子于PDA固體培養基上，24～25℃培養成單個菌落，再將單個菌落移到斜面培養基上，繼續培養到菌絲布滿斜面。然后經子實體栽培，反復篩選，得到菌株cm-C。
1.2.3 蟲體回接法 將試驗室保存的母種cm-A接種到液體培養基中培養成菌懸液5層紗布過濾，濾液待用。取剛化蛹的柞蠶蛹，用75%乙醇消毒。用醫用注射器將上述菌液注射到蛹體內，24～25℃培養變成僵蛹。取長滿菌絲的體內組織粒到PDA斜面，24～25℃條件下繼續培養到菌絲布滿斜面，再分離純化得到菌株cm-D。
1.2.4 耐高溫試驗 將復壯后的新菌株各取1支試管種置34℃恒溫箱24h。
1.2.5 菌絲生長試驗 將復壯后的新菌株及親本菌株各取一小塊接種到盛有PDA固體培養基的培養皿中央，24～25℃下培養3d開始觀察，觀察10d后結束試驗。
1.2.6 子實體栽培 取cm-A、cm-B、cm-C、cm-D相同大小、數量的菌塊接種到PDA液體培養基中，24～25℃靜止培養2d后，120r/min搖床振蕩培養5d，接種米飯罐頭瓶中，每個測試樣30瓶，相同管理條件下培養、觀察，計算平均單瓶產量（鮮重）。
2 結果與分析
2.1 耐高溫試驗 將復壯菌株cm-B、cm-C、cm-D試管菌絲置34℃恒溫箱24h，未發現吐黃水，但生長速度變得緩慢，重新置24℃環境中，恢復了原有的生長速度，說明復壯菌株能耐一定高溫。
2.2 菌絲生長情況 cm-B、cm-C、cm-D與親本cm-A相比，菌絲日平均生長量都有提高，具體見表1。
表1 菌種復壯前后菌絲生長情況（mm）
菌 株 cm-A cm-B cm-C cm-D
日均生長 4.12 5.21 5.51 5.84
2.3 子實體栽培試驗 三種方法復壯的菌種經子實體栽培試驗，通過觀察比較，發現cm-D轉色最快，cm-B及cm-C次之。出草天數均提前4～5d，而且子實體比較均勻，且個數多，從而產量也有明顯的提高。具體見表2。
3 討論
通過上述試驗，可以看出，蛹蟲草的菌種復壯采用這三種方法均是可行的。但因蛹蟲草菌種要求外界條件嚴格，受外界因素影響明顯，僅以常規方法進行復壯，還不能真正解決菌種退化問題。目前，研究發現組織細胞產生的脫氫酶與細胞活力成正比，通過對脫氫酶的測定來提早淘汰退化菌株，減少損失。下一步我們主要從遺傳物質DNA入手，通過分子標記技術RFLP和RAPA。比較正常菌株和退化菌株在基因水平的變異情況，利用電泳圖譜觀察與退化特征相聯系的特異條帶，確定突變基因，想辦法“治療”發生變異的基因，最終找到一種很好的解決菌種退化問題的辦法。
表2 菌種復壯前后子實體栽培情況
菌 株 cm-A cm-B cm-C cm-D
轉色 一般 快 快 快
出草天數（d） 16 10 12 10
產量（s/瓶） 15.5 20.1 22.3 19.8
遼寧省農科院大連生物技術研究所,李亞潔 王鶴 孟楠 石理鑫 王林華
