制種是食用菌生產中的關鍵環節，菌種好壞直接影響食用菌的產量和質量。菌種的好壞又取決于多個因素，如培養基的制備、種源質量、接種技術、保存條件等等。按菌種培養的不同階段，可分為母種、原種和栽培種三類。母種質量的優劣直接影響到原種和栽培種的質量，所以說在把關母種質量環節上；各種影響因素顯得尤為重要。母種培養基的制備看似簡單，要真正做好也非易事?，F在有許多栽培戶自己制作母種，由于制作規程不嚴格，極易出現問題，又由于缺乏系統的專業知識，出現問題也不會解決，致使菌種污染，造成損失?，F就如何提高制作母種培養基的質量，通過制作過程中的幾點注意事項進行闡述，希望給從事菌種制作的技術人員和食用菌栽培戶提供借鑒和幫助。
馬鈴薯培養基（PDA）適合多類食用菌菌絲生長，在制備母種培養基中多以PDA為主，現以PDA為例闡述母種培養基制備中的幾點注意事項。在PDA的制作過程中一般分為材料準備、培養基制作、培養基分裝、滅菌、冷卻五個步驟。以下就每個步驟注意事項分別進行闡述：
1 材料準備
1.1 注意在選取土豆時，應選用無生芽、無青斑的土豆，因為土豆芽部的毒素會影響到菌絲的生長，若在保存過程中土豆生芽，可將芽部徹底清除再用。
1.2 在土豆去皮后，一般切成厚度為0.2cm的薄片，因為土豆片的大小、薄厚會影響相同時間內煮制的效果，如果切的較厚，煮制時間較短，就會影響土豆營養汁液的獲取量，繼而影響培養基的質量。一般0.2cm厚的土豆片煮制時間控制在10min為宜。
1.3 在培養基制作中，要用到起凝固作用的瓊脂條或瓊脂粉，在實際操作中考慮到成本問題，多選用瓊脂條，但瓊脂條加熱后不容易溶化，如果培養基中留有未溶化的瓊脂條，就會影響到培養基的凝固效果。解決辦法是將稱量好的瓊脂條用熱水提前浸泡，讓瓊脂條充分吸水軟化，便于加熱溶化。注意：在夏季制備培養基時瓊脂條的使用量可增加2～4g，便于高溫時的凝固。
1.4 注意在煮土豆片前的加水量，以做1000mL為例，在煮制之前要加水1200～1300mL，由于在煮制過程中水分會不斷蒸發，致使部分水分散失，所以在煮制前將會蒸發散失掉的200～300mL水補充進去。這樣避免因煮制好后水量不足，加入清水造成營養液稀釋現象。
2 培養基制作
2.1 將切好的土豆片加入到1200～1300mL水中，先用大火煮至開鍋后計時，再用文火煮10min后?；?，冷卻過濾。注意計時后用文火煮，不要盲目的認為大火煮制會將土豆中的營養全部煮出來，大火煮制不但會將土豆煮爛煮粘，還會把土豆中的大量淀粉混于營養液中，不利于過濾。注意文火煮制時，讓水略微沸騰即可，鍋蓋虛掩防止水分大量散失。
2.2 將煮好后的土豆汁液經4層紗布過濾，注意至少用4層紗布過濾，目的是為了將煮出的土豆營養液充分的過濾出來，并排除其他雜質。通過紗布過濾出超過1000mL營養汁，超過1000mL是為了在溶化瓊脂的過程中彌補水分蒸發的缺失。
2.3 在加熱溶化瓊脂階段注意，加熱溶化時火不要太急，用玻璃棒一邊攪拌瓊脂一邊溶化，防止瓊脂沉于鍋底而糊鍋。加熱至沸騰時，將火調至文火繼續加熱攪拌，直到用玻璃棒從鍋底挑不出未溶化的瓊脂為止，注意保持營養液1000mL。
3 培養基的分裝
3.1 要提前準備分裝培養液的試管，并要注意：試管一定要刷洗干凈（有條件的可用餐洗凈或其它洗潔凈），倒置瀝干水分；成裝試管的容器不要封閉，封閉的容器不利于水分散失 （有條件的可用烘箱烘干）。試管中若殘留水分會導致滅好菌的試管中水份過大影響接種和發菌。
3.2 分裝培養液時一定要在培養液溫度較高時分裝，不但分裝速度快而且培養液不易凝固。培養液分裝時一般采用醫用膠皮管將培養液導流入試管，注意將膠皮管插入試管內一段距離，不要接觸管口，不要將培養液粘到管口。一般試管的裝液量占試管容積的2/5，以這個容量斜面擺放試管時，不致于斜面過短影響試管利用率或斜面過長接觸到棉塞增加污染機率。
3.3 將分裝好的試管冷卻一下進行棉塞封口，注意盡量用新做的棉塞，用過的棉塞在受潮后極易滋生雜菌。在制作棉塞時注意，由里到外將棉塞依次裹緊，不要松散，將做好的棉塞塞入管口內2/3，管口外留1/3，棉塞做的要松緊適宜，以將棉塞拔出管口聽到砰的一聲響為宜。注意在塞入棉塞前要將管口擦凈，不要有殘留的培養基，殘留的培養基滅菌后不但會與管口粘合致使棉塞拔不出，而且在發菌過程中管口的培養基極易污染到雜菌。
3.4 滅菌前一般要用牛皮紙將試管包裹（7支/把），牛皮紙隔水透氣是最理想的滅菌包裹材料，也可重復使用。許多農戶自己在制作試管時，為了降低成本一般采用報紙包裹，建議在用報紙包裹時最好采用雙層報紙包裹，因報紙在滅菌中極易吸水破裂讓棉塞暴露在空氣中，增加污染機率。若將試管作為菌種保藏時，不建議用報紙包裹，因為報紙在0～4℃低溫冰箱保存時，極易吸收冰箱內的濕氣造成管口棉塞受潮，增加污染機率縮短保藏時間。
4 滅菌
4.1 現在許多農戶在自己制作試管培養基時常用高壓鍋代替，用高壓鍋滅菌不易掌握滅菌的準度，改裝過的高壓鍋自身也存在著安全隱患，所以在滅菌試管時最好用正規的醫用滅菌鍋。
4.2 高壓蒸汽滅菌是利用蒸汽在高壓作用下的穿透力達到滅菌的效果，所以在滅菌前要在鍋與內膽之間加適量的水，水的適量度在平與鍋底內的三腳架為宜，水量過多會造成滅完菌的試管濕度過大，水量過少會滿足不了滅菌過程中的需要。
4.3 在鍋蓋密封時注意，不要將螺絲逐個上緊，要把每個螺絲卡好，以相對方向的螺絲平衡用力擰上，注意不要太緊，所有螺絲擰好后再用力將相對的螺絲平衡用力擰緊。這樣做不但可以將鍋蓋密封緊密而且還可以避免漏氣現象發生，延長高壓鍋的使用壽命。
4.4 滅菌過程中的放氣是至關重要的，放氣閥緊連的金屬管直通到內膽底部，目的就是在放氣時將底部空氣完全排凈，若排不凈空氣，空氣自身產生的壓強會占據壓力表上顯示的總壓強，降低水蒸氣產生的壓強，誤認為滅菌鍋內的滅菌壓強已達到滅菌要求，最終造成滅菌不徹底。所以在排氣時注意大火加溫至壓力表指針達到0.05Pa時打開放氣閥放氣，待指針降下來后重復上述操作直到放氣閥噴出大量霧狀水蒸氣為止。
4.5 放完氣后繼續加熱待指針指到121℃或0.12Pa時，通過斷電或?；鹱屩羔樉S持不變計時30min，注意在維持壓力計時時一定要留有專人看管，切忌滅菌時一心多用，嚴防壓力過高造成危險。
4.6 計時完畢后，停止加熱讓高壓鍋自然冷卻，冷卻至0.05h以下即可放氣，注意放氣時應輕提放氣閥，不要猛提放氣閥，由于鍋內壓力過大會造成水蒸氣外噴范圍較大，要謹防燙傷操作者。還應切忌當壓力還未降至0.05h而打開放氣閥，不但會有燙傷的危險，更重要的是產生的巨大壓差會使試管內的培養基沸騰，造成培養基外溢污染棉塞，嚴重者試管會在鍋內爆裂。
5 冷卻
5.1 當壓力表降至0時，待鍋體略微冷卻，擰開螺絲打開鍋蓋，注意不要將試管立即拿出，由于鍋內水蒸氣含量較大，試管內及棉塞含水量也較大，直接冷卻會導致試管內有冷凝水及棉塞含水量過大，影響接種、發菌，還會加大管口處污染的機率。打開鍋蓋后，讓鍋內大量的水蒸氣散發將試管內及棉塞中的水氣帶走一些，直到包裹試管的紙張見干時即可拿出擺斜面。
5.2 擺斜面的環境要求潔凈，因為斜面擺放環節是高壓滅菌和無菌接種之間試管培養基與環境接觸的中間環節，為降低.試管培養基污染的機率，擺斜面的環境要求潔凈、定期滅菌。
5.3 擺斜面時要趁培養基未凝固前擺放，注意擺放前要朋試管傾斜一定角度旋轉一周將試管內壁上附著的水珠溶于培養基內，降低冷卻后試管內的含水量。
5.4 擺放時將管口墊起一定高度，使試管內的液體培養基傾斜，斜面長度可占試管長度的3/5，注意不要將斜面擺的過長、距離棉塞過近，因為菌絲在生長過程中接觸到棉塞會極易污染雜菌。
5.5 如果制作的試管培養基是為了保存菌種，擺放斜面時注意要讓培養基充分填充試管半球狀的末端，目的是延長試管菌種的保存時間。
5.6 注意在用制作好的試管培養基接種前要檢查試管培養基的滅菌效果，這一步非常關鍵。夏季溫度較高，斜面培養基放置12h即可；冬季溫度較低，斜面培養基要放置24h，有條件可放入恒溫箱內12h。將放置好的斜面培養基對著光源觀察培養基斜面，若斜面光滑證明滅菌徹底無雜菌污染，若斜面不光滑（有細菌狀、霉菌狀等）表明滅菌不徹底，需要重新滅菌。
以上是在實際制作母種培養基中總結的幾點注意事項，通過了解制作母種培養基的每個步驟和注意事項，希望能對從事菌種制作的技術人員和食用菌栽培戶有所借鑒和幫助。
