裝袋、滅菌、接種、培養料配制好后即可裝袋，塑料(9325, -85.00, -0.90%)袋規格為35厘米x17厘米x0.05厘米，高壓滅菌時選用聚丙烯袋，常壓滅菌時可選用聚乙烯袋。每袋裝入干料約450克，要求裝填松緊適宜。裝滿后套上硬塑料頸圈，蓋上蓋子。此時應檢查塑料袋、頸圈、蓋子等有無破損，如有破損則需更換。滅菌分常壓滅菌和高壓滅菌兩種，常壓滅菌于常壓下滅菌12小時，高壓滅菌于1.5千克/平方厘米的壓力下滅菌2小時。滅菌結束后取出料袋，再檢查1遍有無破損和進水袋，然后搬入接種室接種。當料袋溫度低于30%時在接種箱內于無菌條件下接種。為縮短發菌時間，采用兩頭接種，即在袋口接1處，在袋底打穴接1處。接完后迅速蓋好蓋子，用膠帶或專用封口膜封嚴穴口。全部料袋接完后貼上標簽送入養菌室培養。
發苗期管理 1.溫、濕度管理。通過灑水、遮陽、通風等手段，將室溫控制在22--24℃，空氣相對濕度控制在70%以下。2.光照管理。由于猴頭菇菌絲體生長階段不需要光照，故養菌室需遮光保持黑暗。3.其他管理。移入養菌室約3--4天后，菌絲開始吃料，此時要檢查一遍有無污染現象，挑出被污染的料袋。此外，還要檢查有無老鼠等的危害。
