滅菌后的菌袋，移至接種室，袋溫自然降到30℃以下時即可接種。接種前搞好接種室內衛生，用硫磺粉10－15g/m3熏蒸24小時滅菌，而后打開門窗，放出煙霧，菌袋入室。接種工具和原種應在接種前放入接種室，關好門窗，打開臭氧發生器開關，半小時后關閉，再過半小時后接種人員穿干凈的工作服，洗凈雙手，進入接種室接種。用75％的酒精棉球將接種工具擦拭一便，進行消毒，點燃酒精燈，將接種工具在酒精燈火焰上灼燒滅菌后，插在工具架上備用，然后用酒精棉球擦拭雙手，開始接種。采用五人合作接種方式，一人供種，四人解袋系袋，接種后的菌袋放入培養室堆疊擺放成排，每排4－5層，排與排間留通道便于管理。
接種后在培養室擺放好菌袋，發菌管理主要是控溫和通風，及時檢查。培養室內掛溫度計，菌袋堆疊層中間插溫度計，隨時觀察溫度變化，盡可能控制菌袋溫度在23－25℃，室溫在22－23℃，以利發菌。菌絲開始生長時會放出熱量，袋溫不宜高于30℃，避免溫度高“燒菌”，通過倒堆和通風散熱降低溫度。冬季發菌氣溫低，培養室生火加熱增溫，中午通風，以保溫為主。
