【作者】張桂敏 曾毓芳 陳雅蘭 屠俊 何家亨 馬立新
【機構】湖北大學生命科學學院
【摘要】將一段含有質粒ColE1復制起始區(ori)和氨芐青霉素抗性基因(bla)的DNA片段插入到釀酒酵母rDNA片段中部的EcoRI或HpaI位點之間,在pYES2載體的基礎上構建了兩個rDNA介導的釀酒酵母穩定表達載體pHBM367E或pHBM367H。將黑曲霉糖化酶基因導入載體pHBM367H,獲得表達載體pHBM166。為生物安全性的考慮,pHBM166經HpaI酶切去掉2.2kb的ColE1ori和bla片段后轉化釀酒酵母Y33菌株,獲得不含任何抗生素抗性基因的工程菌。隨后,對糖化酶基因在釀酒酵母中的表達、穩定性進行了分析,結果顯示,rDNA介導的糖化酶基因在釀酒酵母中的表達呈現不同的劑量效應,挑選高表達的菌株傳80代之后仍能保持其產糖化酶的穩定性。
【基金】國家自然科學基金(No.30600014)； 湖北省自然科學基金(No.2008CDB058)； 湖北省教育廳重點項目(No.D20101001)； 武漢市科技攻關計劃(No.201021037380-3)；
【關鍵詞】釀酒酵母; rDNA介導; 糖化酶; 生物安全性; 劑量效應;