【作者】陳堅 翁伯琦 陳彬 雷錦桂 朱炳耀 王義祥 楊志敏 江枝和
【機構】福建省農業科學院生物技術研究所福建省農業科學院農業生態研究所福建省農業科學科院土壤肥料研究所
【摘要】根據鏈霉素磁珠和生物素特異結合的特性,用生物素標記的二聚核苷酸重復序列探針從巴氏蘑菇的基因組中分離微衛星序列。將結合于鏈霉素磁珠上的標記探針同兩端連接已知序列人工接頭的巴氏蘑菇DNA酶切片段雜交。洗脫未雜交DNA片段后,用磁珠富集的片段建立微衛星文庫。挑取522個菌落用對應重復序列為引物進行PCR篩選,得到48個陽性克隆,經測序有32個菌落含微衛星序列。微衛星富集效率為陽性克隆數的67%,總克隆數的6%。除去重復或無效的微衛星序列,在設計出的12對用于鑒別85個巴氏蘑菇的Co60輻射變異株微衛星引物中,有4對引物總共擴增出明顯的變異菌株17個。證明有些微衛星位點可用于巴氏蘑菇輻射變異品種的指紋篩選與鑒別。
【基金】福建省科技廳項目(Nos.2002N047,2008N0026)； 國家科技支撐計劃項目(No.2012BAD14B15)；
【關鍵詞】簡單序列重復; 鏈霉素磁珠; 生物素標記探針; 擔子菌門; 分子標記;