【作者】劉莉 肖招燕 郭麗瓊 林俊芳 尤琳烽 廖靜文
【機構】華南農業大學食品學院華南農業大學生物質能研究所
【摘要】對猴頭菌Hericium erinaceus原生質體制備的各種因素進行比較研究,結果表明,猴頭菌原生質體制備的最佳體系為:液體培養5d的猴頭菌絲,以0.6mol/L KCl作為穩滲劑,加入含1.0%纖維素酶+1.0%蝸牛酶+1.0%溶壁酶的復合酶,在30℃酶解猴頭菌絲3h時,原生質體得率達到3.0×106個/mL。潮霉素敏感性測試表明,猴頭菌在PDSA固體培養基上的潮霉素最低篩選濃度為60μg/mL。采用PEG介導的原生質體法,將質粒pBgGI‐hph(含有靈芝gpd1‐Gl啟動子和潮霉素抗性基因hph)轉化猴頭菌原生質體,經潮霉素初步篩選以及PCR鑒定,表明有4株猴頭菌擬轉化子的基因組擴增出hph基因;轉化子經過多次轉接后進行Southern雜交驗證,結果表明4個轉化子的基因組中均穩定整合了hph抗性基因。
【基金】國家自然科學基金(No.31071837； No.31272217)“食用真菌組合表達紫杉醇及其中間產物的基礎研究”和“食用真菌組合表達白藜蘆醇的研究”；
【關鍵詞】猴頭菌; 原生質體制備; PEG介導轉化;