【作者】陳清清 孫炳劍 袁虹霞 施艷 李洪連
【機構】河南農業大學小麥玉米作物學國家重點實驗室河南糧食作物協同創新中心
【摘要】由索氏平臍蠕孢Bipolaris sorokiniana引起的小麥根腐病,常和其他土傳真菌病害混合發生,傳統的癥狀鑒別方法很難區分,導致病害防控難度增加。為建立病菌實時熒光定量檢測體系,根據ITS序列設計引物,篩選出1對特異性引物BS‐F/R,擴增片段大小為280bp。以菌絲DNA為標準品構建實時熒光定量標準曲線,并對其靈敏度、特異性、可重復性進行評價。結果表明,建立的實時熒光定量PCR檢測方法速度快,靈敏度高,特異性強,重復性好。構建的熒光定量PCR標準曲線循環閾值與模板濃度呈良好的線性關系,溶解曲線的吸收峰單一,擴增效率良好。利用該定量檢測體系,可以檢測出田間小麥樣品中52.8fg/μL的病菌DNA。
【基金】國家“十二五”糧食豐產科技工程項目(No.2012BAD04B07)； 中國科學院重點部署項目(No.CXJO120111)； 河南省農業科技創新項目(No.2012-06)；
【關鍵詞】土傳病害; 菌絲DNA; ITS序列; 實時熒光定量PCR; 小麥根腐病菌; 定量檢測;