【作者】張偉楊曉野王瑞祝曉蕊王新芳梁萌
【機構】內蒙古農業大學獸醫學院農業部動物疾病臨床診療技術重點實驗室
【摘要】為了更準確快捷地評價利用酶解法酶解捕食性真菌Duddingtonia flagrans菌絲產生的原生質體數量及菌絲細胞壁降解情況,采用活體熒光染料羧基熒光素乙酰乙酸(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE),對該捕食性真菌菌絲酶解后產生的原生質體進行熒光標記,分別考察了標記濃度、標記時間、孵育溫度對原生質體標記效果的影響,并觀察CFSE標記后的原生質體再生情況。結果表明CFSE終濃度為10μmol/L,標記時間為15min,孵育溫度為36℃,是CFSE標記捕食性真菌原生質體的理想條件,該試驗同時表明CFSE不影響原生質體的再生率。CFSE作為一種活細胞示蹤熒光探針,可以快速高效地標記捕食性真菌原生質體,該方法為捕食性真菌原生質體制備質量的快速評價提供了新的思路。
【基金】國家自然科學基金(31460656)； 內蒙古自治區研究生教育創新計劃研究生科研創新資助項目(B20151012910Z)； 內蒙古自然科學基金(2015MS0308,2014MS0339)； 家畜疫病病原生物學國家重點實驗室開放基金項目(SKLVEB2015KFKT013)~~；
【關鍵詞】羧基熒光素乙酰乙酸(CFSE); 熒光標記; 標記濃度; 標記時間; 孵育溫度; 原生質體再生;