【作者】李健 王鑫 胡志強 亢學平 杜忠偉 王旭 陳艷秋
【機構】延邊朝鮮族自治州農業科學院
摘要：根據樺褐孔菌(Inonotus obliquus)酸性蛋白酶(Acid protease,AP)基因(IO-AP)序列密碼子的偏好性優化選擇酶切位點和載體,成功構建pGEX-4T1-IO-AP原核表達載體;用熱激法將該載體轉化到大腸桿菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,構建樺褐孔菌酸性蛋白酶(IO-AP)重組菌。以此重組菌表達的IO-AP以包涵體形式存在,重組蛋白分子質量約為60kDa。以獲得的較高純度的重組IO-AP作為免疫原,采用傳統3-2-2-2免疫方式免疫4只Balb/c小鼠,通過間接ELISA法測定抗血清效價,4免之后,4只小鼠抗血清效價均大于121500,成功制備了IO-AP多克隆抗體。Western Blotting檢測表明,IO-AP在樺褐孔菌菌核形成過程中的表達呈現先上升后下降的趨勢,以第二個時期(栽培130d,菌核長至1.33g時)AP蛋白表達量最高。
基金：國家自然科學基金項目(31160408)； 延邊食藥用菌工程技術研究中心建設(2016JH02)；
關鍵詞：大腸桿菌重組蛋白; 樺褐孔菌; ELISA法; Western Blotting檢測;