根據“木屑30%、玉米芯16%、棉籽殼22%、麩皮15%、米糠10%、玉米粉5%、石膏2%”的配方，將原材料加入攪拌機后先干拌10min，再加水調節含水量至65%，加水后繼續攪拌30min可進入裝袋工序。使用立式雙沖壓自動裝袋機裝袋，塑料袋規格為對折徑17.5cm，裝料高度為20cm，裝料后料面緊貼塑料袋，存有空隙會導致猴頭菇原基形成。利用全自動高壓蒸汽滅菌器滅菌，維持121℃、2h，滅菌前需要徹底排除冷空氣，滅菌過程中要定時排除冷凝水，保證徹底殺滅菌包中的雜菌。滅菌結束后將滅菌鍋前后門都打開一條縫隙，利用冷卻室的正壓潔凈空氣把滅菌鍋內的蒸汽和熱量排出。蒸汽排除完畢后，將菌包拉入冷卻室進行空調強制冷卻。
菌包中心溫度低于24℃后可以在接種流水線上接種，接種時要嚴格遵守無菌操作規程，盡量縮短打開菌包塑料蓋的時間，避免雜菌污染。
接種完畢后，將菌包移入培養室培養，培養室溫度為23～25℃，相對濕度為65～70%，CO2濃度<4 000μL/L，避光。培養過程中需每日監測菌包中心溫度、菌包之間溫度及室內空氣溫度，需保證菌包中心溫度不超過26℃，通過監測多個位置菌包之間溫度來判斷培養室環境條件均勻程度，如差異較大，則加大內循環風量，盡量使所有菌包處于較為一致的培養條件下。在培養過程中可使用叉車倒垛操作，交換上下層培養床架位置，提高菌包發菌一致性。
