研究了雞腿蘑(Coprinus comatus)黑斑病的發生情況、癥狀及病原菌的分離、培養、回接、鑒定等,證實輪枝孢霉(Verticillium sp.)是引起雞腿蘑黑斑病的病原菌。
雞腿蘑;A黑斑病;A癥狀;A病原;A輪枝孢霉
雞腿蘑(Coprinus comatus)又名毛頭鬼傘、毛鬼傘、刺蘑菇,隸屬于真菌門(Eumycophyta),擔子菌亞門(Basidiomycotina),層菌綱(Hymenomycetes),傘菌目(Agaricales),鬼傘科(Coprinaceae),鬼傘屬 (Coprinus)。雞腿蘑子實體味道鮮美,是一種食、藥兼用蕈菌,深受消費者的歡迎,在國際、國內市場的需求量大。由于栽培雞腿蘑的經濟效益高,近年來,我國的雞腿蘑產量逐年上升。但隨著栽培年限的延長,特別是設施周年栽培的普及,病蟲害問題逐年加重。 2004年,我們在山東省長清、平陰、東平等地發現了一種雞腿蘑新病害——黑斑病。該病發病快、傳染性強、危害嚴重,影響了雞腿蘑的高產穩產。因此,我們對雞腿蘑黑斑病發生的癥狀和病原菌的顯微形態進行了調查研究,旨在明確該病的病原菌、并為雞腿蘑黑斑病的有效防治提供技術支持。
1 材料和方法
1.1ρ本采集
試驗樣本于2005年7月下旬采自山東省長清崮山鎮一山洞栽培的雞腿蘑出菇現場。該栽培洞溫度偏高(22 ℃左右),頂部及四壁滴滲水,空氣濕度大,通風條件差。該病同批發生面積大(約6000 O),發病率在70%以上,發病快、危害嚴重且傳染性極強,難于控制其蔓延。試驗樣本為感染黑斑病的雞腿蘑頭潮子實體,多點取樣采集病菇樣本后帶回實驗室進行分離純化培養。
1.2Σ≡菌分離純化
1.2.1ε嘌基
復合PDA培養基:馬鈴薯200 g,麥麩30 g(濾汁),葡萄糖20 g,蛋白胨3 g,磷酸二氫鉀2 g,硫酸鎂1 g,瓊脂粉20 g,蒸餾水1000 mL。
酸化復合PDA培養基:復合PDA培養基滅菌后,每100 mL培養基中加入1 mL乳酸(山東省萊陽經濟技術開發區精細化工廠生產的分析純,C2H6O3含量85%~99%)酸化,用于病原菌分離。
1.2.2Σ≡菌分離方法
參照方中達的組織分離法[1]。將感病子實體縱刨,夾取病健交界處大約2~3 mm2的一小塊菌肉組織,置于分離培養基平板上,共分離30塊組織塊(每點分離2~3塊),25 ℃培養5 d,連續純化2~3次得到菌絲組織純培養物,保存于復合PDA試管斜面上備用。
1.3回接試驗
按文獻[1]的方法將分離到的病菌制成孢子懸浮液,噴霧接種到生長中的健康雞腿蘑子實體上,對照噴無菌水。分離獲得的每個病菌菌株均為一個接種處理,每個處理與對照均重復2次,每個重復5個菌筒,接種后于12~21 ℃、空氣相對濕度90%培養5 d,觀察雞腿蘑子實體的發病情況。
1.4Σ≡菌顯微鑒定
將分離得到的原病原菌和回接試驗分離得到的病原菌分別接種于復合PDA平板上, 25 ℃培養7 d后,觀察平板上的菌落生長形態;在Olympus AO-120顯微鏡下(600×)檢測病原菌菌絲及分生孢子形態。
2 結果與分析
2.1Σ『χ⒆刺氐
雞腿蘑黑斑病發病初期,菌蕾或幼菇表面可見一層白粉狀病原菌,之后菌蓋上出現黑褐色斑點,并逐漸擴大,病斑中心凹陷、色澤變深,產生灰白色病原物,后期形成較多粉狀孢子。幼菇發病后可繼續生長,但發育不良,色澤灰白,病斑部位質地較干,局限于菌蓋表層組織。隨著菇體生長和病斑發展,子實體多呈畸形,菌蓋短薄,病斑部位開裂干腐,后期菌柄受感染,上部外層組織剝裂,表面粗糙,產生黑斑,菌肉由外向內變污白至黃褐色,病菇腐爛速度較慢,一般不濕腐,不分泌褐色汁液,無特殊臭味。病菌侵染由外向內,病菇整體很快變黑褐,失去商品價值。該病在菇房中傳染性極強,一叢菇體中若有一個子實體菌蓋開始發病,很快便傳染到菇叢中的其它菇或鄰近菇叢,最后造成大面積減產甚至絕產。雞腿蘑黑斑病癥狀見圖1。
2.2Σ≡菌分離、回接與確認
從30塊組織塊中,共分離獲得16株相同的病原菌菌株(有12塊長出單一的病原菌,有4塊同時長出了雞腿蘑菌絲和病原菌,其余14塊均只長出雞腿蘑菌絲),病原菌檢出率為53.3%,未檢出其它雜菌。將16個病菌菌株重新回接到健康的雞腿蘑子實體上,結果16個菌株均引起雞腿蘑子實體出現黑斑,與菇房自然發病癥狀相同,而對照子實體生長正常,無任何癥狀。從發病子實體上可以重新分離到病原菌,其培養性狀與接種菌株完全一致,表明該病原菌為引起雞腿蘑黑斑病的病原菌。
2.3Σ≡菌的形態鑒定
在復合PDA培養基平板上,病原菌菌落呈淡白色,密氈狀,表面有放射狀皺折,中央微隆起(圖2)。顯微鏡檢表明,病原菌分生孢子梗直立,輪生,有3~4個分枝,頂層小梗下部膨大,頂端尖細,梗長20~25 μm,分生孢子單生于小梗頂端,無色,單細胞,大小2.0~2.5 μm×3.5~6.0 μm。菌絲分枝,有隔,直徑2.5 μm左右(圖3)。初步確定該病原菌為輪枝孢霉(Verticillium sp.),隸屬于真菌門 (Eumycophyta),半知菌亞門 (Deuteromycotina),叢梗孢目(Moniliales),叢梗孢科(Moniliaceae),輪枝孢屬 (Verticillium)[2]。
3 討論
通過對雞腿蘑感病子實體的分離、回接驗證及顯微鏡形態觀察,初步證明雞腿蘑黑斑病是由輪枝孢霉(Verticillium sp.)侵染引起的。據報道,危害食用菌——蘑菇(Agaricus bisporus)、平菇(Pleurotus ostreatus)、金針菇(Flammulina velutipes)的輪枝孢霉主要是菌生輪枝霉(V. fungicola Hassebr.,即V. malthouosei Ware),菌褶輪枝霉(V. lamellicola W. Gams)和蘑菇輪枝霉(V. psalliotae Tresch)。對該病的防治除了嚴格菇房環境消毒外,苯丙咪唑類藥物的防治效果較好,但有些地區的輪枝孢霉對苯丙咪唑類藥物已產生抗性[3,4]。本試驗分離到的雞腿蘑黑斑病病原菌具體屬于輪枝孢霉的哪一個種還有待進一步鑒定。
此外,為了控制雞腿蘑黑斑病的發生、發展和危害,還須對該病進行系統研究,以明確病原菌的生物學特性、侵染途徑、流行機制,并進行雞腿蘑抗病品種篩選,以及制定綜合防治技術,遏制該病的發生蔓延,保證雞腿蘑及其它食用菌生產的健康安全發展。お
參考文獻 （略）
文章作者：黃春燕 萬魯長 單洪濤 郭惠東 張柏松 文章來源：《食用菌學報》 2008年第01期
