2.二級搖瓶菌種
為了擴大種源及縮短種子培養周期、二級種可采用搖瓶液體培養。
培養基配方成分同母種培養基不加瓊脂。
將液體培養基分裝入250ml鹽水瓶中，每瓶裝入培養液100ml，瓶口用塑料薄膜封好（1公斤/厘米2），滅菌40分鐘。
將培養成熟的母種，在無菌條件下用接種鉤接入鹽水瓶培養基中，接種量，1支試管斜面菌種接4-6瓶為宜。
接完菌的鹽水瓶培養在搖床上，室溫控制在20-22℃，振蕩培養4-5天，待形成菌球，培養液變清，即可使用。
3.罐頭瓶栽培
培養基：小麥粒、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、蛋白胨、維生素B1等。
方法：每個罐頭瓶裝小麥粒30g、加營養液45-50ml、瓶口用聚丙烯薄膜封好，外用皮圈扎口，放置（1公斤/厘米2）壓力下，滅菌50-60分鐘，取出后放入接種室備用。
接種：用連續注射器接種，將搖瓶菌種用無菌水稀釋，每瓶菌種可接200瓶，方法是1人拿菌種瓶，另一人往培養基中扎破塑料膜注射，每瓶注射5ml菌液，工人操作1小時可接種1000瓶左右，接完種罐頭瓶移入培養室的培養架上進行培養。
培養與采收：培養室溫度控制在20-22℃之間，大約在15天左右菌絲長滿培養基，蟲草菌絲為雪白色不呈絮狀。這時給予足夠的光照，培養基則很快轉成黃色。保持室內空氣新鮮，蟲草子實體在密封的瓶中，仍能正常生長，因此，為減少瓶內水分蒸發無需去掉封口薄膜，只需在薄膜上扎幾個眼即可。40天以后開始長草芽，當蟲草子實體長到瓶口肩部，表面密生許多突起的小疣（子囊殼）即可采收，采收時打開瓶口用鑷子取出子實體，整齊排放在竹簾上陰干、裝入塑料袋封存。
