【作者】郭麗瓊 王秀旭 柳永 舒薇 林俊芳
【機構】華南農業大學食品學院生物工程系華南農業大學測試中心華南農業大學食品學院生物工程系 華南農業大學生物質能研究所廣州 510640
【摘要】利用從香菇菌絲體中克隆的啟動子片段gpd-Le(613bp)和ras-Le(715bp)分別連接于報告基因gfp(綠色熒光蛋白基因)的上游,構建了啟動子功能活性檢測表達質粒pLg-gfp和pLr-gfp。采用PEG介導法把表達質粒pLg-gfp和pLr-gfp分別與輔助質粒pCc1001(含有trp1基因)共轉化進色氨酸營養缺陷型的灰蓋鬼傘粉孢子的原生質體中。經過選擇培養基篩選、假定轉化子的分子鑒定以及GFP熒光檢測。結果表明:香菇gpd-Le啟動子在灰蓋鬼傘的菌絲中具有較強驅動外源gfp基因表達的活性,在熒光顯微鏡和共聚焦顯微鏡下觀察到gfp基因表達的綠色熒光。而香菇ras-Le啟動子沒有檢測到有驅動外源gfp基因表達的活性。
【基金】國家自然科學基金(No．30371000,39960050,30060054)； 廣東省科技攻關(No．2004820101001)； 廣東省自然科學基金(No．5006680,032239)；
【關鍵詞】香菇; 啟動子活性; 灰蓋鬼傘; 共轉化; gfp基因;