【作者】曲廣林 李仕貴 徐正君 王玉平 黃文娟 林瑜凡 萬佳 馬炳田
【機構】四川農業大學水稻研究所
【摘要】由立枯絲核菌Rhizoctonia solani引起的水稻紋枯病(rice sheath blight)是水稻三大病害之一。G蛋白β亞基(G-protein beta-subunit)編碼的蛋白作為重要的信號傳導蛋白,在其致病分子機制中起著重要作用。為了解G蛋白β亞基基因的作用方式,本文根據同源物種G蛋白β亞基相關序列設計引物,通過PCR(polymerase chain reaction)和RT-PCR(reverse transcriptase PCR)技術,獲得了以水稻為寄主的立枯絲核菌G蛋白β亞基(G-protein beta-subunit of rice Rhizoctonia solani,簡寫gbrrs1)的基因序列和開放閱讀框ORF(open reading frame)(GenBank登錄號EU267677)。該基因全長1867bp,含有4個內含子和5個外顯子,各內含子長度在54bp-65bp,且序列均符合5′-gt……ag-3′模式。開放閱讀框1047bp,編碼348aa,推測的蛋白質分子量為38.23kDa,等電點為6.54。該蛋白質具有2個alpha-helix和7個betasheet的二級結構,每個beta sheet又包含4個beta-strand。gbrrs1在N端有2個alpha-helix,緊接著是由7個beta sheet由無規則卷曲連接形成的桶形結構。GenBank Blast結果表明,gbrrs1與四種真菌生物G蛋白β亞基的氨基酸序列同源性較高,與Lentinula edodes(AAT74567.1)、Coprinopsis cinerea(EAU92269)、Ustilago maydis(AAN33051)和Filobasidiella neoformans(AAD03596)的一致性分別達到了89%、88%、81%和81%。將gbrss1的開放閱讀框克隆于原核融合表達載體pGEX-4T-2中,經異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導,獲得了相應蛋白的表達。
【基金】教育部長江學者和創新團隊發展計劃項目(No.IRT0453)；
【關鍵詞】信號傳導; 開放閱讀框; 原核表達;