【作者】戚元成張倩薛元邱立友申進文
【機構】河南農業大學生命科學學院
【摘要】為解析糙皮側耳原基期與菌絲期差異表達的基因,本研究以原基期c DNA為檢測子(tester)、雙核菌絲期c DNA為驅趕子(driver),采用抑制性消減雜交法(suppression subtractive hybridization,SSH)構建了糙皮側耳SSH c DNA文庫。菌液PCR驗證SSH c DNA文庫插入c DNA片段后,挑取了2 055個差異轉化子,差異轉化子經3次反向Northern雜交篩選,得423個信號差異顯著的克隆;陽性克隆測序后,經NCBI數據庫Blastn和Blastx比對,共得206條差異表達序列(expressed sequence tag,EST),重復序列去除后,有46個基因參與了細胞急救和防御、能量代謝、轉錄和蛋白調控、膜蛋白和信號轉導,18個基因編碼未知功能的推定蛋白,5個無任何同源性的新基因。挑取10個差異表達基因進行半定量RT-PCR,發現這些序列在原基期的表達水平顯著高于菌絲期。結果表明,本研究成功構建了糙皮側耳原基期與菌絲期SSH c DNA文庫,為進一步分離糙皮側耳生長發育相關基因并研究糙皮側耳的發育機制奠定了基礎。
【基金】國家現代農業產業技術體系專項資金(CARS-24)； 河南省高等學校重點科研項目(13B180051)； 河南省高等學校重點科研項目(14A180023)~~；
【關鍵詞】糙皮側耳; 抑制性消減雜交cDNA文庫; 異表達基因; 反向Northern blot; 半定量RT-PCR;