【作者】孫墨可張曼田娟李曉薇李海燕李玉
【機構】白城市農業科學院生物技術實驗室吉林農業大學生物反應器與藥物開發教育部工程研究中心吉
摘要：靈芝Ganoderma lingzhi是我國著名的藥用真菌。但是,作為一種營養和保健價值都非常高的大型擔子菌,靈芝還缺乏完善的轉基因方法和安全轉基因體系。本研究建立了免疫調節蛋白基因的過表達系統,并利用真菌特異性啟動子GPD、終止子NOS和目的基因LZ-8構建真菌特異性雙T-DNA表達載體p SB130NG-LZ8;利用溶壁酶提取靈芝原生質體,并用FDA染色法檢測靈芝原生質體活性,原生質體成活率約為80%。通過PEG轉化法對靈芝原生質體成功進行了轉化,轉化得到的原生質體在帶有潮霉素抗性平板上長出,轉化率為3–4/μgpSB130NG-LZ8+107個原生質體。轉化子通過PCR檢測和熒光定量PCR檢測,獲得LZ-8在靈芝中的過表達。
基金：吉林省重點科技攻關項目(20150204027NY)~~；
關鍵詞：靈芝; 雙T-DNA載體; 目的基因LZ-8; PEG轉化法; 熒光定量PCR;