【作者】喬宇 毛愛軍 何永志 劉偉豐 董志揚
【機構】中國科學院微生物研究所中國科學院微生物研究所 北京100080
【摘要】采用外顯子拼接的方法,以里氏木霉Trichoderma reesei基因組 DNA 為模板,克隆出內切-1,4-β-D-葡聚糖酶II基因egl2的全編碼序列,將其插入巴斯德畢赤酵母Pichia pastoris表達載體pPIC9K中,并位于α-因子信號肽序列的下游,獲得重組質粒pQY2025。重組質粒線性化后用電穿孔法導入畢赤酵母Pichia pastoris菌株GS115中,經大量篩選,獲得高效分泌表達內切葡聚糖酶II的畢赤酵母工程菌株Gp2025。用甲醇誘導培養基進行搖瓶發酵,培養基中內切葡聚糖酶II的活力可達1573.0U/mL,同時對重組內切葡聚糖酶II的性質進行了初步研究。
【基金】國家“863”計劃(2001AA214151)； 中國科學院知識創新方向性課題 (KJCX2-SW-206-1)；
【關鍵詞】纖維素酶; 分泌表達; 應用;
圖 3 分泌表達的重組內切葡聚糖 重組畢赤酵母工程菌株