【作者】劉守安 李多川 張燕 郭芳先 俄世瑾
【機構】山東農業大學環境生物系 山東農業大學環境生物系 泰安271018
【摘要】嗜熱毛殼菌ChaetomiumthermophilumCT2可產生具有重要工業生產價值的纖維素酶類。RT-PCR擴增cbh1成熟蛋白的編碼基因,利用基因重組的方法構建可在畢赤酵母分泌表達系統中表達纖維二糖水解酶的重組表達載體,并轉化畢赤酵母得到重組子。在畢赤酵母醇氧化酶AOX1基因啟動子的作用下,重組蛋白得到高效表達,小規模發酵量達1.42mg/mL。表達蛋白分泌到培養基中,分子量約80kD;以脫脂棉為底物測得酶活為21U/mL。表達蛋白在60℃穩定,70℃保溫60分鐘仍保持90%的酶活力,具有較高的熱穩定性。
【基金】國家863計劃資助項目(2003AA241162)； 國家自然科學基金(30270013,30170013)；
【關鍵詞】纖維素酶; 整合表達; 羧甲基纖維素;
圖2 pPIC9K/cbh1重組表達質粒的酶切鑒定
培養液中的酶蛋白量為 1.42 mg/mL。
重組纖維二糖水解酶Ⅰ的溫度穩定性